Каков метод обнаружения использования О - фталевого альдегида для анализа нуклеиновых кислот?

Привет! Как поставщик о-фталевого альдегида, я очень рад поговорить с вами о том, как его можно использовать для анализа нуклеиновых кислот. О-фталевой альдегид, часто сокращенно обозначаемый как ОРА, представляет собой довольно изящное химическое вещество, нашедшее несколько действительно интересных применений в мире анализа нуклеиновых кислот.

Что такое О-фталевой альдегид?

Прежде всего, давайте немного познакомимся с OPA. Это органическое соединение с четко выраженной химической структурой. Это бесцветное твердое вещество, растворимое в органических растворителях, и обладающее некоторыми уникальными химическими свойствами, которые делают его полезным в различных аналитических методах.

ОРА известен своей способностью реагировать с первичными аминами. Эта реакция очень важна, когда дело доходит до анализа нуклеиновых кислот, поскольку нуклеиновые кислоты, такие как ДНК и РНК, имеют компоненты, которые могут взаимодействовать с OPA. Когда ОРА реагирует с первичными аминами при определенных условиях, он образует флуоресцентные производные. Эту флуоресценцию мы можем использовать для обнаружения и анализа нуклеиновых кислот.

Методы обнаружения с использованием О - фталевого альдегида нуклеиновых кислот

Обнаружение на основе флуоресценции

Одним из наиболее распространенных способов использования OPA для анализа нуклеиновых кислот является обнаружение на основе флуоресценции. Вот как это работает.

Нуклеиновые кислоты содержат азотсодержащие основания, некоторые из которых имеют первичные амины. Когда OPA добавляется к образцу, содержащему нуклеиновые кислоты, в присутствии восстановителя, такого как 2-меркаптоэтанол, происходит реакция. OPA реагирует с первичными аминами на основаниях нуклеиновых кислот с образованием высокофлуоресцентного производного изоиндола.

Затем мы можем использовать флуоресцентный спектрофотометр для измерения интенсивности флуоресценции. Интенсивность флуоресценции пропорциональна количеству нуклеиновой кислоты, присутствующей в образце. Это означает, что, измеряя флуоресценцию, мы можем количественно определить количество нуклеиновой кислоты в образце.

Например, в исследовательской лаборатории учёный может взять клеточный лизат, содержащий ДНК. Они добавляют в лизат ОРА и 2-меркаптоэтанол, дают реакции протекать в течение определенного периода времени, а затем измеряют флуоресценцию. На основе стандартной кривой, которая была ранее установлена ​​с использованием известных концентраций ДНК, они могут определить концентрацию ДНК в клеточном лизате.

Хроматографическое разделение и детектирование

OPA также можно использовать в сочетании с хроматографией для анализа нуклеиновых кислот. Хроматография – это метод разделения различных компонентов смеси.

В ионообменной хроматографии нуклеиновые кислоты разделяют по заряду. После разделения элюированные фракции могут быть подвергнуты реакции с ОРА. Образовавшиеся флуоресцентные производные затем можно обнаружить с помощью детектора флуоресценции, присоединенного к хроматографической системе.

Этот метод позволяет не только количественно оценить нуклеиновые кислоты, но также разделить и идентифицировать различные типы нуклеиновых кислот или фрагментов нуклеиновых кислот. Например, если у вас есть смесь фрагментов ДНК разной длины, ионообменная хроматография может разделить их, а обнаружение на основе OPA может помочь вам проанализировать каждый фрагмент.

Капиллярный электрофорез с обнаружением ОРА

Капиллярный электрофорез — еще один мощный метод анализа нуклеиновых кислот. В нем используется узкая капиллярная трубка, наполненная раствором электролита. Электрическое поле прикладывается к капилляру, заставляя нуклеиновые кислоты мигрировать по трубке в зависимости от соотношения их заряда и массы.

Подобно хроматографии, после разделения в капилляре нуклеиновые кислоты могут вступать в реакцию с ОРА. Затем флуоресцентные продукты обнаруживаются, когда они проходят через окно обнаружения в капилляре. Этот метод обеспечивает разделение с высоким разрешением и чувствительное обнаружение нуклеиновых кислот. Его часто используют в таких приложениях, как секвенирование ДНК и анализ небольших молекул РНК.

Преимущества использования О-фталевого альдегида для анализа нуклеиновых кислот

Одним из самых больших преимуществ является его чувствительность. Обнаружение на основе флуоресценции с использованием OPA позволяет обнаруживать очень низкие концентрации нуклеиновых кислот. Это имеет решающее значение во многих биологических и медицинских приложениях, где количество нуклеиновой кислоты, доступной для анализа, может быть ограничено.

Еще одним преимуществом является его специфичность. OPA специфически реагирует с первичными аминами на основаниях нуклеиновых кислот, что означает, что он может отличать нуклеиновые кислоты от других биомолекул в образце. Эта специфика помогает получать точные результаты в сложных биологических образцах.

OPA также относительно прост в использовании. Условия реакции не слишком сложны, а оборудование, необходимое для обнаружения флуоресценции, например флуоресцентный спектрофотометр, обычно доступно во многих лабораториях.

Приложения в разных областях

В области молекулярной биологии анализ нуклеиновых кислот на основе OPA используется для изучения экспрессии генов. Ученые могут измерить количество мРНК (типа нуклеиновой кислоты) в клетке, чтобы понять, какие гены экспрессируются и на каких уровнях.

В медицинской диагностике его можно использовать для выявления наличия возбудителей. Например, нуклеиновые кислоты вирусов или бактерий можно обнаружить с помощью методов на основе OPA. Это может помочь в ранней диагностике заболеваний и в контроле эффективности лечения.

В криминалистике анализ на основе OPA может использоваться для анализа образцов ДНК с мест преступлений. Даже небольшие количества ДНК можно обнаружить и количественно оценить, что очень важно при судебно-медицинских расследованиях.

Сопутствующие химические продукты

Если вас интересуют другие химические продукты, относящиеся к области органических и фармацевтических промежуточных продуктов, перейдите по этим ссылкам:

• Fmoc - Ile - Aib - Leu - Asp(OtBu) - OH CAS 2915356 - 38 - 4
• 2 - [2 - (2 - аминоэтокси) этокси] уксусная кислота CAS 134978 - 97 - 5
• 1 - Бромадамантан

Контакт для закупок

Если вы заинтересованы в покупке о-фталевого альдегида для анализа нуклеиновых кислот или у вас есть какие-либо вопросы о наших продуктах, свяжитесь с нами. Мы здесь, чтобы помочь вам со всеми вашими требованиями по закупкам химикатов. Независимо от того, являетесь ли вы исследовательским учреждением, диагностической лабораторией или фармацевтической компанией, мы можем предоставить высококачественный офталевый альдегид для удовлетворения ваших конкретных потребностей.

Ссылки

• Хадд А.Г., Джейкобсон С.С., Хергенрёдер Р. и др. (1997). Субаттомольный аминокислотный анализ методом капиллярного электрофореза с лазерно-индуцированной флуоресценцией. Аналитическая химия, 69 (24), 4825–4831.
• Джонс, Б.Н., и Гиллиган, П.Х. (1983). Высокоэффективное жидкостное хроматографическое определение субпикомольных количеств аминокислот методом предколоночной флуоресцентной дериватизации с о-фталевым альдегидом. Аналитическая химия, 55 (11), 1956–1960.
• Йоргенсон, Дж.В., и Лукач, К.Д. (1981). Капиллярный зональный электрофорез. Аналитическая химия, 53 (8), 1298–1302.